本篇文章給大家談?wù)劥竽c桿菌檢測(cè)方法，以及大腸桿菌檢測(cè)試紙對(duì)應(yīng)的知識(shí)點(diǎn)，希望對(duì)各位有所幫助，不要忘了收藏本站喔。

怎么檢驗(yàn)飲料中的大腸桿菌？？

大腸桿菌檢驗(yàn)（包括(一)檢驗(yàn)方法；(二)培養(yǎng)基 ）

(一)檢驗(yàn)方法

1．乳糖發(fā)酵試驗(yàn)。以無菌操作采取樣品，采取量及稀釋倍數(shù)，依據(jù)國家或當(dāng)?shù)匦l(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求及樣品污染情況而定。將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在l m J以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，lm1及1mI以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36±l℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2小時(shí)，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。

2．分離培養(yǎng)。將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36±l℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18～24小時(shí)，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。

3．證實(shí)試驗(yàn)。在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落l～2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36±1℃ 溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2小時(shí)，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣，革

蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。

4．報(bào)告。根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每l 00ml(g)大腸菌群的最可能數(shù)。

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(二)培養(yǎng)基

①乳糖膽鹽發(fā)酵培基

成分：蛋白胨：20g

豬膽鹽(或牛，羊膽鹽)：5g

乳糖:10g

0．04％溴甲酚紫水溶液: 25m1

蒸餾水: 1 000m1

制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管l 0ml，并放入一個(gè)小倒管，高壓滅菌115℃15分鐘。

附注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培基除蒸餾水外，其他成分加倍。

用途：乳糖發(fā)酵試驗(yàn)用。

原理：細(xì)菌分解糖類是依靠細(xì)菌細(xì)胞所產(chǎn)生的各種酶類的作用，細(xì)菌產(chǎn)生的分解糖類的酶，隨細(xì)菌種類不同而異，可以此來鑒別細(xì)菌。

乳糖是雙糖，細(xì)菌分解雙糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被細(xì)菌利用，而半乳糖則需在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為葡萄糖后再被利用。

糖發(fā)酵試驗(yàn)主要是測(cè)定細(xì)菌分解糖類以后所產(chǎn)生的酸，以培基pH降低(指示劑變色)作為觀察結(jié)果的指標(biāo)。

大腸桿菌等細(xì)菌在酸性環(huán)境中，由于甲酸脫氫酶的作用，可使甲酸分解成CO2和H2，在培基中產(chǎn)生大量氣體，進(jìn)入倒管中，以便觀察。

注：常用于供發(fā)酵試驗(yàn)的各種糖類、醇類和糖苷類(見表3-1)

②伊紅美藍(lán)瓊脂培基

成分：蛋白胨 10g

乳糖 10g

磷酸氫二鉀 2g

瓊脂 17g

2％伊紅Y溶液 20ml

0．65％美藍(lán)溶液 10ml

蒸餾水 1000ml

pH7.1

制法：將蛋l(fā)白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正pH，分裝于燒瓶內(nèi)，高壓滅菌121℃15分鐘備用。臨用時(shí)加入乳糖，并加熱溶化瓊脂，冷至50一55℃，加入伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻，傾注平板。

原理：大腸菌群細(xì)菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使伊紅與美藍(lán)結(jié)合而成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有時(shí)還可產(chǎn)生金屬光澤。黑色程度與光澤產(chǎn)生情況與伊紅、美藍(lán)二者比倒有關(guān)。不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌(如沙門氏菌、志賀氏菌)則為無色菌落。

③乳糖發(fā)酵培基

成分：蛋白胨 20g

乳糖 10g

O．04％溴甲酚紫水溶液 25ml

蒸餾水 1000ml

pH7．4

制法：將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗(yàn)要求分裝30ml、10ml或3ml，并放入一個(gè)小倒管，高壓滅菌115℃15分鐘。

附注： ’

(1)雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。

(2)30ml和10ml乳糖發(fā)酵管專供醬油及醬類檢驗(yàn)用．3ml乳糖發(fā)酵管供大腸菌群

證實(shí)試驗(yàn)用。

4．蛋白胨水

成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1 000ml pH7．4

大腸菌群檢測(cè)方法

GB4789.3-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)》中的規(guī)定操作步驟：

1、乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

2、分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。

3、證實(shí)試驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。

SN0169-92《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法》規(guī)定操作：

1、推測(cè)試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

2、證實(shí)試驗(yàn)：將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。

擴(kuò)展資料：

大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。

大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌提出來的，主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對(duì)人體健康危害性的大小。

糞便是人類腸道排泄物，其中有健康人糞便，也有腸道患者或帶菌者的糞便，所以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外，同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在，因而食品中有糞便污染，則可以推測(cè)該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著食物中毒和流行病的威脅，必須看作對(duì)人體健康具有潛在的危險(xiǎn)性。

參考資料來源：百度百科-大腸菌群

自來水中大腸桿菌檢測(cè)方法（國家標(biāo)準(zhǔn)方法）

大腸桿菌的檢驗(yàn)方法（SN方法）

致瀉性大腸桿菌的檢驗(yàn)（GB方法簡介）

大腸桿菌O157:H7的檢驗(yàn)

（一）國家標(biāo)準(zhǔn)：國家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法，即：乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。

（二）原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，等效采用美國FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對(duì)出口食品中的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)。本方法采用兩步法：h

推測(cè)試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。K

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證實(shí)試驗(yàn)：將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。

檢驗(yàn)大腸桿菌

一、細(xì)菌的分離鑒定

1、標(biāo)本：腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。

2、分離培養(yǎng)與鑒定：糞便標(biāo)本直接接種腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。血液需先經(jīng)肉湯增菌，再轉(zhuǎn)種血瓊脂平板。其他標(biāo)本可同時(shí)接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。

37℃孵育18～24小時(shí)后，觀察菌落并涂片染色鏡檢。采用一系列生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定。腸致病性大腸桿菌須先作血清學(xué)定型試驗(yàn)。必要時(shí)檢定腸霉毒素。

泌尿系統(tǒng)除確定大腸桿菌外，還應(yīng)計(jì)數(shù)，每毫升尿含菌量≥100，000時(shí)，才有診斷價(jià)值。

二、衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查

大腸桿菌不斷隨糞便排出體外，污染周圍環(huán)境和水源、食品等。取樣檢查時(shí)，樣品中大腸桿菌越多，表示樣品被糞便污染越嚴(yán)重，也表明樣品中存在腸道致病菌的可能性越大。故應(yīng)對(duì)飲水、食品、飲料進(jìn)行衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查。

1、細(xì)菌總數(shù)：檢測(cè)每毫升或每克樣品中所含細(xì)菌數(shù)，采用傾注培養(yǎng)計(jì)算。中國規(guī)定的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是每毫升飲水中細(xì)菌總數(shù)不得超過100個(gè)。

2、大腸菌數(shù)指數(shù)：指每立升中大腸菌群數(shù)，采用乳糖發(fā)酵法檢測(cè)。中國的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是每1000ml飲水中不得超過3個(gè)大腸菌群；瓶裝汽水、果汁等每100ml大腸菌群不得超過5個(gè)。

三、全自動(dòng)微生物定量分析儀（TEMPO）檢測(cè)

全自動(dòng)微生物定量分析（TEMPO）儀的大腸桿菌群計(jì)數(shù)檢測(cè)有TC和CC兩種方法。TEMPOTC的開發(fā)是為了獲得NFISO4832標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據(jù)BAM方法專門用于24h計(jì)數(shù)食品中大腸桿菌群的方法。該法是為了獲得和AOAC官方方法966.24及美國公共健康聯(lián)合會(huì)檢測(cè)乳制品檢測(cè)方發(fā)（SMEDP）一致的效果。TEMPO系統(tǒng)根據(jù)陽性空的大小和數(shù)目來推算出原始樣本中大腸桿菌群數(shù)目。

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擴(kuò)展資料：

多管發(fā)酵法是一種檢測(cè)水體中大腸桿菌的傳統(tǒng)方法，這種方法是在44.5℃的含有熒光底物的培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)24h，而后能產(chǎn)生分解熒光底物——葡萄糖醛酸酶，從而釋放出熒光產(chǎn)物，進(jìn)而使培養(yǎng)基在紫外光照射下產(chǎn)生特征熒光。

此方法可被用來對(duì)原樣品中的菌落數(shù)作統(tǒng)計(jì)學(xué)估計(jì)。

一般涉及以下試驗(yàn)：首先是發(fā)酵，在單料或雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)發(fā)酵；然后是分離培養(yǎng)試驗(yàn)，利用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)皿分離；接著是在乳糖發(fā)酵管中進(jìn)行二次發(fā)酵，最后通過芽孢染色、革蘭氏染色、顯微鏡觀察等來完成。

多管發(fā)酵法對(duì)試驗(yàn)條件要求不高，成本低，但是檢測(cè)時(shí)間較長，容易受其他條件干擾，進(jìn)而影響到測(cè)定結(jié)果的精確度。

參考資料來源：/baike.baidu.com/item/%E5%A4%A7%E8%82%A0%E6%9D%86%E8%8F%8C/556836?fr=aladdin#3"target="_blank"title="百度百科-大腸桿菌"百度百科-大腸桿菌