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牛血清蛋白溶液的配制(牛血清白蛋白的簡介)

2023-03-09 09:48:01 百科達人 3353次閱讀 投稿:晚安

今天凡太百科給各位分享牛血清蛋白的知識,其中也會對牛血清蛋白溶液的配制進行解釋,如果能碰巧解決你現在面臨的問題,別忘了關注本站,現在開始吧!

牛血清蛋白的牛血清蛋白介紹

牛血清白蛋白的相對分子質量為10的4次方這個級別,它不是一定的,而是多聚物的,有的地方測試數據為70 000,這一數據是在做PCR的時候使用的數據。

牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。

牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質含量的標準曲線用。

一般買回來的牛血清蛋白是細小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。

用途

1、特純級牛血清蛋白

用途:用作酶標、金標等診斷試劑的封閉劑,生化試驗等。

性狀:淡黃色干燥粉末

2、無脂肪酸牛血清蛋白

用途:用作酶標、金標等診斷試劑的封閉劑、保護劑,尤其適用于容易受脂肪酸影響的產品和試驗。

性狀:淡黃色干燥粉末

3、無蛋白酶牛血清蛋白

用途:用于酶標、金標等診斷試劑的封閉劑、保護劑,尤其適合血液脂類的診斷試驗、脂類診斷試劑及對純度要求高的產品。

性狀:淡黃色干燥粉末

4、細胞培養(yǎng)級牛血清蛋白

用途:無血清培養(yǎng)基的蛋白添加劑,供細胞培養(yǎng)使用。

性狀:淡黃色干燥粉末白蛋白

測定

標準曲線

一般用分光光度法測物質的含量,先要制作標準曲線,然后根據標準曲線查出所測物質的含量。因此,制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術 。

測定方法

1. 凱氏定氮法

2. 雙縮脲法

3. Folin-酚試劑法

4. 紫外吸收法

5. 考馬斯亮藍法

標準曲線制作

試劑

1. 考馬斯亮藍試劑:

考馬斯亮藍G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。最終試劑中含0.01%(W/V)考馬斯亮藍G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。

2. 標準蛋白質溶液:

純的牛血清血蛋白,預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,根據其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

器材

1. 722S型分光光度計使用及原理。

2. 移液管使用。

制作步驟

試管編號 0 1 2 3 4 5 6

100ug/ml標準蛋白(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

0.15mol/L NaCl (ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4

考馬斯亮藍試劑 (ml) 5 5 5 5 5 5 5

搖勻,1h內以1號管為空白對照,在595nm處比色

3、以A595nm為縱坐標,標準蛋白含量為橫坐標(六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐標軸上繪制標準曲線。

(1)、利用標準曲線查出回歸方程。

(2)、用公式計算回歸方程。

(3)、或用origin作圖 ,測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6

一般相關系數應過0.999以上,至少2個9以上。

(4)、繪圖時近兩使點在一條直線上,在直線上的點應該在直線兩側。

含量的測定

樣品即所測蛋白質含量樣品(含量應處理在所測范圍內),依照操作步驟1操作,測出樣品的A595nm,然后利用標準曲線或回歸方程求出樣品蛋白質含量。

一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間,所以上述樣品如果A595nm值太大,可以稀釋后再測A595nm值,然后再計算。

注意事項

1. 玻璃儀器要洗滌干凈。

2. 取量要準確。

3. 玻璃儀器要干燥,避免溫度變化。

4. 對照:用被測物質以外的物質作空白對照。

牛血清白蛋白的簡介

牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一種球蛋白,包含607個氨基酸殘基,分子量為66.446kDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用。

英文同義詞:

nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLATED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLATED

中文同義詞:

蛋白粉;牛白蛋白;卵蛋白粉;血清蛋白;血清白蛋白;牛血蛋白質;復合氨基酸;牛血清蛋白;牛血清白蛋白;血清白蛋白(牛) CAS號: 9048-46-8 英文名稱: Bovine albumin 中文名稱: 牛血清白蛋白 CBNumber: CB5107573 分子式: N/A 英文別名: Bovine serum albumin

牛血清蛋白的用途介紹

1、生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究

2、醫(yī)藥保健食品、調味品

3、維持滲透壓、pH緩沖、載體作用

生產方法

以牛血為原料分離出血清,用硫酸銨分級沉淀后,經辛酸處理精制而得。

貯存方法

每10g加100ml水進行溶解,或用 PBS溶解也可,視用途而決定。然后分裝成小支。若不使用防腐劑可貯存在零下20或30攝氏度的恒溫柜中,若使用防腐劑(如0.1%疊氮化鈉)則可貯存在零上4攝氏度的環(huán)境下。一般可存放數月不變質。防腐劑可能對牛血清白蛋白的效果造成影響,應慎用。

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